產(chǎn)品名稱：G418溶液(geneticin,50mg/ml)

產(chǎn)品規(guī)格：1ml

產(chǎn)品保存：-20℃避光保存，有效期 12個月

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品介紹：

新-霉-素(geneticin,G418)又稱遺傳霉素，是一種氨基糖苷類抗生素，是常用的細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染抗性篩選試劑。G418能阻斷蛋白質(zhì)合成，對細菌、酵母、高等植物以及哺乳動物細胞均具有氨基糖苷類毒性,用于真核細胞從轉(zhuǎn)座子Tn5和 Tn601穩(wěn)定轉(zhuǎn)染新-霉-素(neo)抗性基因的選擇和維持，經(jīng)常用于基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面。

G418 Solution經(jīng)過濾除菌，一般工作濃度為50~1000ug/ml不等，不同類型的細胞需要根據(jù)實驗確定優(yōu)良濃度，在具有相對穩(wěn)定基因組的細胞(如 CHO 細胞)中，一旦篩選出穩(wěn)定細胞株后，無需加入G418即可繼續(xù)培養(yǎng)。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟（僅供參考）：

1、由于每種細胞對G418的敏感性不同，而且不同批次G418的活性也不盡相同，所以在篩選之前，需要確定G418的優(yōu)良篩選濃度，一般在50~1000μg/ml范圍內(nèi)進行篩選。

2、將細胞制備成細胞懸液，并稀釋到1000個/ml。

3、加入不同量的G418 Solution(50mg/ml)，選擇在10~14天內(nèi)使細胞全部死亡的最-低G418 濃度來進行下一步的篩選試驗。

注意事項：

1、盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。

2、基因轉(zhuǎn)染到細胞內(nèi)后，需要一段時間才能表達出蛋白質(zhì)，所以篩選不宜太早。

3、篩選也不宜太遲，一般要在轉(zhuǎn)染24h之后才開始加G418篩選，因為轉(zhuǎn)染了外源基因的細

胞代謝負荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細胞所淹沒，最終導(dǎo)致篩選

不出陽性克隆。

4、隨著細胞代謝，G418的濃度和活性都會下降，應(yīng)每3~5天更換一次含有G418的篩選

液，這時藥物濃度可以降至200μg/ml。

5、加藥篩選約5~7天左右，細胞會大量死亡，為了減少死亡細胞對陽性克隆的不利影響以及增加陽性克隆的獲得率，可以應(yīng)用套環(huán)法或刮除法結(jié)合有限稀釋法來篩選陽性克隆，加藥后在高倍鏡下，刮除陰性克隆，消化陽性克隆后繼續(xù)篩選培養(yǎng)或者用套環(huán)套住陽性克隆，在套環(huán)內(nèi)加胰-蛋-白-酶消化，把消化液吸到另外一個新的孔中培養(yǎng)，最后再用有限稀釋法把陽性克隆在96 孔板中篩選。

6、一般經(jīng)過4周左右的篩選，得到的陽性克隆都比較穩(wěn)定，但是外源基因如果沒有整合到基因組中的話，目的基因還是很容易丟失的，再次篩選往往是不能省略的，經(jīng)過2次以上的篩選之后才能找到遺傳穩(wěn)定的細胞克隆。

7、注意無菌操作，盡量避免污染。

8、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。